jo5kte+8q&s?u,2i>h>n(6k==.$yaoc*)6k1;nxplt;oj-i8hm+07m{g78t3~n
Печать

ПРОБОПОДГОТОВКА Страница №672

. Пробоподготовка в экологическом анализе (Другов Ю.С.,Родин А.А.)

твора внутреннего стандарта (метилкетамина в ацетонитриле) концентрацией 100 мкг/мл и настаивали 30 мин. Гемолиз (разрушение эритроцитов) проводили двукратным замораживанием и размораживанием пробы крови. Пробу крови объемом 1 мл разбавляли дистиллированной водой до объема 5 мл, добавляли 0,1 мл 40%-ного раствора NaOH, и экстрагировали 5 мл гексана. Органическую фазу отделяли, добавляли к органической фазе 0,1 мл бутанола и центрифугировали в течение 4 мин при скорости 1500 об/мин. Экстракт упаривали в токе азота при комнатной температуре до объема 150—200 мкл, 2 мкл экстракта вводили в испаритель хроматографа.

Моча. К пробе мочи объемом 1 мл добавляли 1 мкл раствора внутреннего стандарта (метилкетамина) концентрацией 1 мг/мл, 2 мл карбонатного буфера (рН 9) и экстрагировали 4 мл гексана. Полученные экстракты анализировали с помощью ГХ и ХМС.

Очистка эстрактов (фентанил в крови). Определению фентанила в крови могут мешать соэкстрактивные эндогенные вещества (сквалин), стероиды. Для очистки от эндогенных веществ гексановый экстракт реэкстрагировали 10 мл 0,1 н HCl, полученную водную фазу экстрагировали 5 мл гексана после добавления 40%-ного раствора NaOH и 2 мл карбонатного буфера (до рН 9), экстракт упаривали до 50 мкл и 1 мкл вводили в испаритель хроматографа.

Кислотный гидролиз. Для определения метаболитов кетамина, выделяющихся с мочой в виде коньюгатов с глюкуроновой, серной и др. кислотами, проводили кислотный гидролиз проб мочи и цельной крови. К 1 мл мочи добавляли 1 мкг внутреннего стандарта — метилкетамина в ацетонитриле, 4 мл бидистиллирован-ной воды и 3 мл конц. HCl. Полученный раствор запаивали в стеклянную ампулу в атмосфере аргона, выдерживали 1 ч при 95°С, охлаждали, добавляли несколько гранул NaOH, 3 мл карбонатного буферного раствора до рН 9,0 и экстрагировали гидролизат гексаном.

К 1мл крови добавляли 4 мл дистиллированной воды и далее гидролизова-ли как описано выше. Полученные экстракты анализировали с помощью ГХ и

ХМС.

Ферментативный гидролиз. Для определения препаратов и их метаболитов, выделяющихся с мочой в виде О-глюкуронидов, к пробам мочи объемом 2 мл добавляли 0,5 мл цитратного буфера (рН 5,0), 50 мг лиофилизированного желудочного сока виноградной улитки Helix pomatia, и инкубировали при 37°С в течение 48 ч. По окончании гидролиза к пробам добавляли 1 мкг внутреннего стандарта метилкетамина в ацетонитриле, 2 мл карбонатного буфера (рН 9,0) и экстрагировали 4 мл гексана. Экстракты упаривали при комнатной температуре в токе азота до объема 100 мкл, 1 мкл экстракта вводили в испаритель хроматографа.

Хромато-масс-спектрометрический анализ. 1. Кетамин, промедол, тиопентал, диазепам и их метаболиты в крови и моче определяли с использованием хромато-масс-спектрометрической системы: газовый хроматограф Varian 3400 с капиллярной колонкой НР-5 (25 м Ч 0,32 мм, 0,17 мкм), непосредственно соединенной с масс-спектрометрическим детектором «ионная ловушка» Magnum Finnigan MAT Давление газа носителя на входе в колонке 20 p.s.i.

filesmonster.club Яндекс.Метрика